新选组的标志性特色莫过于严厉的“局中法度”（局中法度「きょくちゅうはっと」）、山形图案的“羽织”（羽織「はおり」）、以及“诚”字队旗。

“局中法度”

不可违背武士道（士道ニ背キ間敷事）
不可擅自脱离组织（局ヲ脱スルヲ不許）
不可私下筹款受贿（勝手ニ金策致不可）
不可擅自诉讼调停（勝手ニ訴訟取扱不可）
不可无故私闘（私ノ闘争ヲ不許）
凡违反上述规定者，一律切腹谢罪（右条々相背候者切腹申付ベク候也）

“羽织”

衣袖上印有白色山形图案的浅葱色的羽织是新选组的重要标志之一。据说山形图案是以前赤穗浪士（赤穂浪士「あこうろうし」）所穿羽织的图案，而浅葱色是武士切腹自杀时所穿礼服的颜色。主要于成立之初队内的主要人物穿着，一年后停用，最后穿著的时间大约在池田屋事件（池田屋事件「いけだやじけん」）期间。

“诚”字队旗

红底白字或红底金字，横三尺竖四尺，下端有同队服一样的山形图案。据说选用该字作为队旗标志的一个原因是队旗飘扬时，“诚”字看起来像是近藤的老家“试卫馆”（試衛館「しえいかん」）的“试”字。除此之外还有其余6种队旗。“诚”字队旗出现时，能给予敌人强大的震慑力量。

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